还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒

品牌：Solarbio | 货号：BC1170

英文名称 : Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit
检测方法 : 可见分光光度法

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BC1170-50管/48样	Solarbio	50管/48样	240.00元

测定意义：GSH 是细胞内*主要的抗氧化巯基物质，在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此，测定细胞内 GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
测定原理：DTNB 与 GSH 反应生成复合物，在 412nm 处有特征吸收峰；其吸光度与 GSH 含量成正比。
自备仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
一、试剂盒组成：
试剂Ⅰ 液体 1 瓶 50ml（4℃保存）
试剂Ⅱ 液体 1 瓶 50ml（4℃保存）
试剂Ⅲ 液体 1 瓶 15ml（4℃避光保存）
标准品粉末 1 支 10mg（4℃避光保存）
说明书一份

二、操作步骤

1、样品的处理

组织处理

新鲜组织首先用PBS 冲洗2 次，然后称取动物组织或者植物组织0.1g。加入用试剂Ⅰ润洗过的匀浆器中（匀浆器提前放冰上预冷）；然后加入1ml 试剂Ⅰ（组织/试剂Ⅰ比例保持不变即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；8000rpm 4℃离心10min；取上清液放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10 天）。

血液处理

血浆：将收集的抗凝血于4℃，600g 离心10 分钟，吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的试剂Ⅰ, 4℃，8000g 离心10 分钟,将上清移入新的试管中放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10 天）。

血细胞：将收集的抗凝血于4℃，600g 离心10 分钟，弃去上层血浆用3 倍体积的PBS 清洗3 次（用PBS 重悬血细胞，600g 离心10 分钟），加入等体积试剂Ⅰ，混匀后4℃放置10 分钟，8000g 离心10 分钟，吸取上清放于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10 天）。

细胞处理

收集不少于108 个细胞，首先用PBS 清洗细胞2 次（PBS 重悬细胞，600g 离心10 分钟），加入3 倍细胞沉淀体积的试剂Ⅰ重悬细胞，反复冻融2-3 次（可在液氮中冻结，37℃水浴中溶解），8000g 离心10 分钟，收集上清于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10 天）。

2、分光光度计预热30min 以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

3、试剂Ⅱ放置37℃（哺乳动物）或25℃（一般物种）水浴中保温30min。

4、空白管检测：取1ml 比色皿，依次加入100 L 蒸馏水，700 L 试剂Ⅱ，200 L 试剂Ⅲ，混匀，放置2min 后测定412nm 吸光度A1。

5、制作标准曲线

称取1mg 标准品，用1ml 蒸馏水溶解，浓度为1mg/ml。取适当溶液配制浓度为200 g/ml、

100 g/ml、50 g/ml、25 g/ml、12.5 g/ml 的标准品（试剂Ⅰ十倍稀释后进行稀释）。

每管混匀后静置2min，检测412nm 处吸光度，吸光度减去空白孔（A1）为横坐标，浓度为纵坐标做标准曲线。

6、样品管测定：取1ml 比色皿，依次加入100 L 样品，700 L 试剂Ⅱ，200 L 试剂Ⅲ，混匀后静置2min 检测412nm 处吸光度A2。

三、GSH 含量计算

样品OD412 即A2 减去空白管A1 得到△A，将△A 带入标准曲线公式，即可计算出每0.1g 组织或相应血液、细胞样品中还原性谷胱甘肽的含量。

样品鲜重中GSH 的含量计算：GSH 含量（ g/gFW）=C/ gFW 其中C 为1ml 样品提取液中GSH 的含量（ g），FW 为样品鲜重，FW=0.1g。

四、注意事项

1、样品处理需匀浆完全，若当天不能完成测量，可放-80℃保存。

2、标准品：还原型谷胱甘肽现配现用。

3、若不确定样品中GSH 含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。

4、因为试剂Ⅰ中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。

5、本试剂盒所配制的试剂除测定48 个样品外，至少可做4 次标准曲线。

相关文献：

《Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin‐induced skeletal muscle injury》作者:Ming Song , Fang‐fang Chen , Yi‐hui Li, Lei Zhang , Feng Wang, Ran‐ran Qin ,Zhi‐hao Wang , Ming Zhong , Meng‐xiong Tang , Wei Zhang , Lu Han 期刊:Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle 影响因子:10.754 PMID:29152896
《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影响因子:3.06 PMID:30301226
《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimers disease mice》作者:Fang?Zhou Chen Ying Zhao Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影响因子:2.928 PMID:30365070
《Inhibition of MUC1‐C regulates metabolism by AKT pathway in esophageal squamous cell carcinoma》作者:Xin GongSun YongQiang Zhao Bin Jiang ZhongWei Xin Mo Shi Liang Song QiMing Qin Qiang Wang XiangYan Liu 期刊:J. Cell. Physiol. 影响因子:4.522 PMID:30523643
《Light-Responsive Metal–Organic Framework as an Oxidase Mimic for Cellular Glutathione Detection》作者:Yufeng Liu,Min Zhou,Wen Cao,Xiaoyu Wang,Quan Wang,Sirong Li and Hui Wei 期刊:Anal Chem. 影响因子:6.35 PMID:31148448