吉列替尼Gilteritinib （ASP2215） 是一种有效的 ATP 竞争性的 FLT3/AXL 抑制剂，IC50 分别为 0.29 nM/0.73 nM。

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　　生物活性

　　体外研究

　　在测试的 78 种酪氨酸激酶中，吉列替尼Gilteritinib （ASP2215） 在 1 nM 时抑制 FLT3、白细胞酪氨酸激酶 （LTK）、间变性淋巴瘤激酶 （ALK） 和 AXL 激酶超过 50%，IC50 FLT3 的值为 0.29 nM，比 c-KIT 的效力高约 800 倍 吉列替尼Gilteritinib 在 1 nM（FLT3、LTK、ALK 和 AXL）或 5 nM（TRKA、ROS、RET 和 MER）浓度下将 78 种测试激酶中的 8 种活性抑制超过 50%。集成电路50FLT3 的 s 为 0.29 nM，AXL 的 s 为 0.73 nM。吉列替尼Gilteritinib 在 IC 上抑制 FLT350这比抑制 c-KIT 所需的浓度 （230 nM） 强大约 800 倍。对内源性表达 FLT3-ITD 的 MV4-11 和 MOLM-13 细胞评估 吉列替尼Gilteritinib 的抗增殖活性。治疗 5 天后，吉列替尼Gilteritinib 以平均 IC 抑制 MV4-11 和 MOLM-13 细胞的生长50s 分别为 0.92 nM （95% CI: 0.23-3.6 nM） 和 2.9 nM （95% CI: 1.4-5.8 nM）。MV4-11 细胞的生长抑制伴随着 FLT3 磷酸化的抑制。相对于载体对照细胞，磷酸化 FLT3 水平在用 0.1 nM、1 nM 和 10 nM 吉列替尼Gilteritinib 处理 2 小时后分别为 57%、8% 和 1%。此外，低至 0.1 nM 或 1 nM 的剂量会抑制磷酸化的 ERK、STAT5 和 AKT，所有这些都是 FLT3 激活的下游靶点。为了研究 吉列替尼Gilteritinib 对 AXL 抑制的影响，用 吉列替尼Gilteritinib 处理表达外源性 AXL 的 MV4-11 细胞。在 1 nM、10 nM 和 100 nM 浓度下持续 4 小时，吉列替尼Gilteritinib 治疗使磷酸化 AXL 水平分别降低 38%、29% 和 22%

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

　　体内研究

　　在 MV4-11 异种移植小鼠中，吉列替尼Gilteritinib （ASP2215） 在肿瘤中的浓度比口服 吉列替尼Gilteritinib 10 mg/kg 4 天的血浆浓度高 20 倍以上。吉列替尼Gilteritinib 治疗 28 天导致 MV4-11 肿瘤生长的剂量依赖性抑制，并在超过 6 mg/kg 时诱导完全肿瘤消退。此外，吉列替尼Gilteritinib 降低了骨髓中的肿瘤负荷并延长了静脉移植 MV4-11 细胞的小鼠的存活率

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　　实验参考方法

　　激酶检测

　　吉列替尼Gilteritinib 的激酶抑制活性针对一组 78 种测试激酶进行测试，使用的 ATP 浓度大约等于 K米TK-ELISA 或芯片外迁移率变化测定中每种激酶的值。最初，测试了两种浓度的 吉列替尼Gilteritinib（1 nM 和 5 nM）以评估每种化合物对 TK 活性的抑制作用。然后使用一定剂量范围的 吉列替尼Gilteritinib 进行进一步研究以确定 IC501 nM 吉列替尼Gilteritinib 以及 c-KIT 抑制活性 > 50% 的激酶值。TK-ELISA 和 MSA 检测用于进行 IC50FLT3、LTK、AXL 和 c-KIT 的研究；进行 HTRF KinEASE-TK 检测以评估 IC50 棘皮动物微管相关蛋白样 4-ALK （EML4-ALK） 的价值[2].

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　　细胞检测

　　使用 CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay 评估 吉列替尼Gilteritinib 对 MV4-11 和 MOLM-13 细胞的影响。进行后续研究以检查 吉列替尼Gilteritinib 和 Quizartinib 对表达 FLT3-ITD、FLT3-D835Y、FLT3-ITD-D835Y、FLT3-ITD-F691 L 或 FLT3-ITD-F691I 的 Ba/F3 细胞的影响。MV4-11 和 MOLM-13 细胞用 DMSO 或增加浓度的吉列替尼Gilteritinib（0.01、0.1、1、10 和 100 nM）处理 5 天，并使用 CellTiter-Glo 测量细胞活力[2].

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　　动物实验方法

　　老鼠

　　在移植了 MV4-11 AML 细胞的裸鼠中评估了抗肿瘤活性。还研究了异种移植小鼠的药代动力学。MV4-11异种移植小鼠用处理吉列替尼Gilteritinib的口服给药以10mg / kg的4天。吉列替尼Gilteritinib 治疗 28 天导致 MV4-11 肿瘤生长的剂量依赖性抑制，并在超过 6 mg/kg 时诱导完全肿瘤消退

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